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ELISA试剂盒开发基本原则之我见
发布时间:2019-10-22 阅读:80
    ELISA试剂盒开发基本原则,我认为,开发人员既要充当开发者,也要充当使用者,还要充当评价者。
    何为开发?
    开发人员zui主要的角色,肯定是试剂盒开发,刚开始一定是以某种通用的试验方案,如通用的缓冲液体系,包括包被工作液,封闭液,酶标记物缓冲液,抗原稀释液等,十几或几十个项目齐头并进,按照现有的套路,一起刷下来,zui后可以肯定的是,只有30%-40%的在这种体系下能够一直进行下去,这还算是比较多的了,而另外的60%-70%项目,会在某些环节卡住,也就是我们说的,实验中碰到的问题,这很正常,因为不同项目特性不一样,结构不一样,这很好理解,因为一般缓冲液里都含有保护剂,如抗原或抗体稀释液里会用到牛血清或牛血清白蛋白,有些项目会与这些保护剂发生交叉反应而使本底增加,抑或是封闭液里的保护蛋白成分,如酪蛋白,卵清蛋白,乳清蛋白,鱼明胶,猪明胶等,尽管这些蛋白对于大部分项目来说,属于“惰性蛋白”,但是还是会存在些项目,会与这些蛋白交叉,所以这些因素都必须充分考虑。
一轮实验下来,那顺利的30%-40%项目,将按照性能评估指导原则、行业标准以及企业标准,进行线性、灵敏度、精密性、回收率、干扰实验、稳定性等性能评估;剩余60%-70%项目将根据具体情况,分门别类的进行解决,优化,调整,包括但不限于更换保护剂、调整缓冲液、改变操作模式,选用不同方法学,甚至是更换抗原抗体原料,但是每一个原料都有它的特性,不建议zui开始就考虑,要好好珍惜这样的原料,永远要记住,只有在试验中碰到问题,遇到挫折,才能让你进步,才能真的学到东西。
    何为使用?
    开发者要充当使用者,zui主要的目的就是把自己当作试剂盒的使用者,什么意思呢?简单理解,就是别人买试剂盒干什么,怎么用?这里开发者就是要充当“别人”,只有把自己当作使用者,才能zui大限度了解别人在使用过程中zui希望试剂盒能做什么,能测什么。这样才能更精准的指导开发,在开发过程中就充分把这些因素考虑进去,比如尽可能将各种类型的样本都测上并找出建议稀释倍数,如血清样本、血浆样本、尿液、唾液、细胞上清等。充分考虑各种情况,对于试剂盒开发肯定是有益的。
    何为评价?
    试剂盒开发绝对不是单打独斗,一定是一个团体的实验过程,顺利的项目和不顺利的项目,在实验过程中很多方面是可以相互借鉴的,因此,开发人员之间要经常地开组会进行讨论,相互评价,甚至是指出不足,实验室应当是一个充满包容,积极采纳意见,积极改正,敬畏科学的地方,只要有利于试剂盒开发正向发展,就应当采纳并进行实验验证,目的只有一个,就是开发出更好的试剂盒。

    以上是一些关于试剂盒开发的愚见,欢迎批评指正!很多试剂盒开发实验中遇到的问题及解决方案,将在后续以详细的例子展现出来,希望大家可以相互交流,相互学习,共同进步!





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