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试剂盒选的好!实验难不倒!
发布时间:2019-10-08 阅读:200

    曾经,有个声音在我耳边悄悄地问:CST有细胞组分分离的方法吗?

    今天,小编在这里向各位亲隆重介绍:CST细胞组分分离试剂盒(#9038)以及分离效率检测试剂盒(#11843)!

    惊不惊喜?意不意外?试剂盒选的好!实验难不倒!

    首先让我们来说说分离试剂盒!该试剂盒用于悬浮或贴壁培养的细胞系。它能快速有效的将培养的细胞分成三个不同的组分(细胞质、细胞膜/细胞器、细胞核/细胞骨架)进而确定蛋白质的亚细胞定位。细胞组分分离对于研究许多蛋白质的定位、观察蛋白质的迁移和确定蛋白-蛋白络合物(如细胞支架有关的蛋白)有重要意义。

    试剂盒中CIB缓冲液分离细胞质的蛋白,MIB缓冲液分离完整的膜和细胞器的蛋白,CyNIB缓冲液分离细胞核和细胞骨架的蛋白。试剂盒包含足够的缓冲液,能进行20次测定。

    那么,分离到的各组分在用于SDS-PAGEWB分析其他指标之前,可先测定组分分离效率。这就用到了我们的检测试剂盒Cell Fractionation Antibody Sampler Kit #11843。其中#8727 MEK1/2(D1A5) Rabbit mAb用于检测细胞质的蛋白(Cyto),#5318AIF(D3902)XP® Rabbit mAb用于检测完整的膜和细胞器的蛋白(Mem),#4499Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb#5741 Vimentin(D21H3) XP®Rabbit mAb可分别用于检测细胞核和细胞骨架的蛋白(Nuc)。

    全细胞裂解物(WCL)代表总蛋白质。该图显示细胞质的蛋白(Cyto),完整的膜和细胞器的蛋白(Mem)和细胞核和细胞骨架的蛋白(Nuc)分离干净且效率高。

    zui后,小编给大家总结了实验中的注意事项,都是干货哦!

    1、保存各组分时需十分小心不要吸到沉淀,以免污染。

    2、所有裂解液短期保存(1月内)需放 -20°C,长期保存(1月以上)则需放-80°C

    3、除了添加和超声 CyNIB buffer 外,其他所有步骤都需要在冰上或 4℃ 操作。

    4、该试剂盒可用于贴壁或悬浮的细胞。

    5、步骤DE中所给体系,是根据10cm 培养皿中90%融合度的HeLa细胞(~5x106个细胞)得来的。

    6、如果 CyNIB buffer 溶解后有絮状物,请在37℃水浴中孵育至完全溶解。

    71X 蛋白酶抑制剂 (#5871) (500μl buffer 中加入5μl 100x 的蛋白酶抑制剂,试剂盒包含) 1 mM 新鲜的 PMSF (#8553) (500μl buffer 中加入2.5 μl 200 mM PMSF, 试剂盒不包含) 需现配现用。

    8Buffer中已含磷酸酶抑制剂,无需额外添加。

 






                                                    (本文内容来源于网络,如有侵权请联系我们删除)

 
 

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