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为您解说ELISA试剂盒在实验中的几个问题
发布时间:2018-10-08 阅读:201
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。以下内容为您解说ELISA试剂盒在实验中的几个问题:
1、质控血清的运用
卫生部临床查验基地制备的乙肝标志物质控血清,能够在-20℃保持半年定值不变。冰冻状态融化运用时,应先混匀,未用完有些可在4℃保留5天。不宜重复冰融或自行分装。展开某项查验的室内质控工作需要的质控血清,通常按3-6个月用量预备。自制的不定值质控血清,在一批质控血清将用完之前,需预备下一批质控血清。质控血清请求功能安稳,较长期内效价不变,其理化性质应与患者样本附近,这么才干有效地起到监测效果。
2、临界值质控血清
质操控血清分定值和不决值两种。如只用一份质控血清定值,通常定在正常值与异常值交界点上,定性测守时处于弱阳性水平,称为临界值。乙肝标志物临界值的拟定,应按临床请求,为临床供给一致的判别弱阳性的规范。
临界值质控血清能够作为试剂盒中的阳性对照品和阴性对照品以外的第三个对照品,它能够活络地反映出试剂盒的检出水平,确保弱阳性反响的标本不漏检。
3、质控血清的制备
每个实验室能够根据自己的条件,选用临床基地供给的质控血清,或按以下办法自己制备本室运用的质控血清(以乙肝质控血清为例)。
(1)搜集新鲜的无溶血、无黄疸、无细菌污染的阳性血清。
(2)56℃加热10小时来活。
(3)离心或过滤除掉沉淀。
(4)用10%的小牛血清或正常人血清(PBS缓冲液)将搜集的血清稀释至所需的浓度。如能用正常的人血清稀释更好,因其成份更接近于检测标本。
(5)抽滤除菌。按一次运用的量分装小安瓿,封口,20℃保留备用。不行重复冻融。
被检物请求检出的水平常被认为是质控血清应挑选的水平。如果该实验还有其它请求,则应加所请求浓度的质控物。
(6)标定含量。20-30次测定成果删去>±2SD数据的均值作为靶值,并与已知定值血清对比测定。

 
 

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