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酶联免疫检测试剂盒操作程序

发布时间：2018-04-17 阅读：411次

1、标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。）
160 ng/L 5号标准品 120μl的原倍标准品加入120μl标准品稀释液
80 ng/L 4号标准品 120μl的5号标准品加入120μl标准品稀释液
40 ng/L 3号标准品 120μl的4号标准品加入120μl标准品稀释液
20 ng/L 2号标准品 120μl的3号标准品加入120μl标准品稀释液
10 ng/L 1号标准品 120μl的2号标准品加入120μl标准品稀释液
2、根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3、加样：
（1）空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗IL-1抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂A&B和终止液，其余各步操作相同；
（2）标准品孔：加入标准品50ul，链霉亲和素-HRP50ul（标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加）；
（3）代测样品孔：加入样本40ul，然后各加入抗IL-1抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul，盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃温育60分钟。
4、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6、显色：每孔先加入显色剂A50ul，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
7、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后10分钟以内进行。
9、根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。

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