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白介素ELISA试剂盒实验操作注意事项 |
发布时间:2018-11-07 阅读:420次 |
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白介素ELISA试剂盒采用双抗体夹心ELISA法的原理制备,适用于体外定量检测人血清、血浆、组织、体液或细胞培养上清液中的天然和重组的IL-1a浓度。白介素-1(IL-1)是IL-1α和IL-1β两种蛋白的统称,是由不同基因编码的,但它们识别细胞表面相同的受体。IL-1α和IL-1β结构相似,在氨基酸水平上有25%的同源性;两种都是由分子量31kDa前体裂解成17.5kDa的蛋白质。IL-1α和IL-1β都不包含典型的疏水信号肽,但是有证据证明一些非典型路径可以分泌这些因子。大量的IL-1α以前体形式保留在胞内。一部分未修饰的IL-1α运输到细胞表面但仍与细胞相连。未修饰的膜结合IL-1α体现生物活性,邻近的细胞旁分泌IL-1。IL-1α和IL-1β与特定的受体结合后发挥其作用。
白介素ELISA试剂盒实验操作注意事项:
1、 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
3、为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
4、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
5、底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
6、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸,使用时必须注意安全。
7、各步骤加样均应使用加样器,并经常校准其准确性,以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
8、每次试验测定的同时做标准曲线,。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔zui高浓度的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n)。
9、配制试剂时,要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂,充分混匀对测试结果尤为重要,zui好使用微量振荡器(使用zui低频率),如无微量振荡器,可在反应前手工轻轻晃动酶标板1分钟,例如做圆周动作,使加入孔中的反应液混匀。
10、实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作,并在使用前充分预热。
11、手工洗板应注意:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
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